细胞膜选择透过性(细胞选择透过性与什么有关)

导语：Calcein AM,细胞可透过性染料

Calcein-AM,细胞可透过性染料,是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，由于它在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂 (如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate) 相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。Calcein不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。使用了Calcein的活性检测的实验结果是十分可信并且与标准的51Cr-释放法所得结果相一致的。Calcein的激发和发射波长分别为490nm和515nm。Calcein-AM可与PI结合使用，分别对活细胞和死细胞染色，可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。

钙黄绿素-AM Calcein-AM 应用：

Calcein-AM 探针可用于对活细胞进行染色，并已观察到在细胞质雪旺氏细胞中发出亮绿色荧光。 据文献记录，钙黄绿素-AM 是 Mdr（P-糖蛋白 (Pgp) 和多药耐药蛋白 (MRP)）的中性底物，并已用于流式细胞术研究以分析 P-gp 和 MRP 的功能。 研究表明，钙黄绿素-AM 可用于检测 MDR 介导的耐药性，并可通过 PGP 从质膜转运。 线粒体通透性研究利用钙黄绿素-AM 作为细胞溶质荧光团。 Calcein-AM 已被用作线粒体通透性研究中的细胞溶质荧光团，以对孔转换进行成像。

Calcein-AM 使用方法：

1. 用 DMSO 制备1mM 的 Calcein, AM溶液后，再采用 PBS 将其稀释制成为 1～50 μM 的Calcein, AM溶液。

2. 其次再将 1/10的细胞培养基体积的 Calcein, AM溶液 加入到细胞培养基中。

3. 在37℃恒温条件下，培养细胞约 15～30分钟。

4. 采用 PBS 或 适当的缓冲液洗涤细胞两次。

5. 使用490nm激发波长，515 nm发射波长滤光片的荧光显微镜进行观察细胞。

※ 如果 Calcein, AM 很难进入细胞，可以使用表面活性剂，例如：Pluronic F127。

※ 也可以用 1/10浓度的Calcein, AM溶液 代替培养基。

案例：

Confocal laser scanning microscope (CLSM) images of calcein-AM (green) and propidium iodide (red and yellow) (货号：YZM018808 )stained hepatocytes after 3 days of culture on different substrates.见图！

光谱图：

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