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细胞增殖和细胞毒性检测实验的区别(细胞毒性实验和细胞增殖实验)

在生活中,很多人可能想了解和弄清楚新版细胞毒性检查法——相对增殖度法的相关问题?那么关于细胞增殖和细胞毒性检测实验的区别的答案我来给大家详细解答下。

细胞增殖和细胞毒性检测实验的区别(细胞毒性实验和细胞增殖实验)

国家药典委员会重新制定细胞毒性检查法国家药包材标准,公示期三个月。此次拟制定的细胞毒性检查法主要用于医药包装容器、材料细胞毒性检查。

本法系将供试品或供试品液接触细胞,通过对细胞形态、增殖和抑制影响的观察,评价供试品对体外细胞的毒性作用。

试验用西细胞 推荐使用小鼠成纤维细胞L-929。试验时采用传代48~72h生长旺盛的细胞。

试验前的准备 与样品及细胞接触的所有器具均需无菌。必要时可采用湿热灭菌如115度保持30分钟;干热灭菌如250度保持30分钟或用1480度保持2h。

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供试品液的制备 提取介质的选择宜反映出提取的目的,优先选用含血清哺乳动物细胞培养基作为提取介质。除另有规定外,按品种项下规定的提取介质制成供试品液。将供试品切成0.5cmX2cm条状,用湿热灭菌或紫外线照射消毒后,置玻璃容器内。

相对增殖度法

阴性对照液制备 为不加工试品的细胞培养液

阳性对照液制备 取生物毒性阳性参比物质, 照供试品制备项下的规定进行,如6.3%苯酚的细胞培养液。

检查法 取33个培养瓶,分别加入4X104 个/ml浓度细胞悬液1ml,细胞培养液4ml,置(37±1)度,(5±1)%CO2的条件下培养24h。培养24h后弃去原培养液。

阴性对照组:取13个培养瓶加入5ml阴性対照液:阳性对照组 取10个培养瓶加入5ml阳性对照液:实验组,取10个培养瓶加入5ml含50%供试品液的细胞培养液,置(37±1)度,(5±1)%CO2的条件下培养7天。

细胞形态学观察和计数:在更换细胞培养液的当天,取3瓶阴性对照组,并在更换后第2、4、7天,每组各取3瓶进行细胞形态观察和细胞计数。

毒性评定 细胞形态分析按下表所示。

根据各组细胞浓度按下式计算细胞相对增殖度(RGR):

结果评价 试验组相对增殖度(以第7天的细胞浓度计算)为0级或1级判为合格。试验组相对增殖度为2级,应结合形态综合评价,轻微毒或无毒的判为合格。试验组相对增殖度为3级~5级判为不合格。

温馨提示:通过以上关于新版细胞毒性检查法——相对增殖度法内容介绍后,相信大家有新的了解,更希望可以对你有所帮助。