狗肾细胞(犬肾的类型及结构)

导语：MDCK(NBL-2) 犬肾细胞 基础介绍与培养传代

细胞介绍

1958年，MadinSH和DarbyNB从表观正常的成年雌性科克猎犬的肾建立了MDCK细胞株，MDCK(NBL-2)细胞角蛋白免疫过氧化物酶染色呈阳性。该细胞曾被用于研究β淀粉前体蛋白的形成及其蛋白水解产物的分类。

基本信息

细胞别称：Madin Darby Canine Kidney;NBL-2

细胞来源：肾

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

安全等级：BSL1

包装规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

倍增时间：2~3天

传代比例：1:3

保藏机构：ATCC;CCL-34;ATCC;CRL-6253;CCTCC;GDC0012;JCRB;IFO50071;JCRB;JCRB9029

培养保存

培养体系：MEM+10%FBS

培养条件：气相:空气,95%;CO2,5%;温度:37℃

冻存条件：基础培养基+8%DMSO+20%FBS,液氮保存

传代步骤

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化；按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀；收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。冻存步骤细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数；4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10(6)/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识；将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。细胞用途

仅供科研使用。

质检结果

支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。

注意事项

1.收到常温细胞后，请检查产品包装状况，若发现破损、溢出及污染，请及时联系我们。2.先不打开培养瓶盖，用75%酒精处理培养瓶表面，如果是贴壁细胞， 请在培养箱中静置2-3小时（根据细胞密度状况决定）用来稳定细胞状态。如果是悬浮细胞则不需要静置，直接按照悬浮细胞步骤操作。3.静置完成后，在显微镜下确认细胞生长状态并拍照记录。（照片能有效帮助我们提供售后服务）4.细胞培养过程中如有异常状况，欢迎进行技术交流。

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