凝集溶解试验(凝集反应的原理是什么)

导语：凝集反应——万融实验

颗粒性抗原与相应抗体以合适的比例发生特异性反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集物，称为凝集反应（agglutination）。颗粒性抗原与相应抗体在一定的条件下，直接反应产生凝集现象，称为直接凝集反应。将可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，形成肉眼可见的凝集物，称为间接凝集反应。其中将抗体吸附于载体表面检测抗原的间接凝集反应，称为反向间接凝集试验。

一、ABO血型测定（玻片凝集反应）

【实验原理】红细胞表面有血型抗原A和／或B，当与相应的抗体（抗A、抗B）相遇时，在一定条件下反应，形成肉眼可见的凝集物。常采用玻片凝集反应。

【材料与仪器】

1. 标准抗A和抗B血清、生理盐水（N S）、碘酒、75％酒精。

2. 洁净载玻片、试管、无菌采血针、消毒棉签等。

【实验方法】

1. 制备红细胞悬液：碘酒、酒精消毒无名指指端，用灭菌采血针采血，滴入加有0.5ml生理盐水的试管中，混匀，制成红细胞悬液。

2. 取洁净载玻片一张，在载玻片两端分别加入抗A、抗B血清各一滴。

3. 加红细胞悬液各一滴，混匀，10～15min内观察结果，出现凝集物为凝集反应阳性。

4. 必要时在低倍镜下观察凝集现象（图1-1）。

图1-1　玻片凝集反应

【实验结果】

与抗A血清发生凝集者为A型血；与抗B血清发生凝集者为B型血；与抗A、抗B血清均发生凝集者为AB型血；与抗A、抗B血清均不发生凝集者为O型血。

【思考题】

1. A血型的人含有哪种抗体？位于什么部位？AB血型的人含有什么抗原？位于什么部位？

2. 试举例说明玻片凝集反应的其他临床应用。

二、试管凝集反应

【实验原理】

用已知的抗原与不同稀释度的血清进行反应，根据凝集现象判断血清中相应抗体的滴度，如肥达反应。

【材料与仪器】

1. 伤寒患者血清（1∶10稀释）、伤寒杆菌O和H抗原菌液、甲型和乙型副伤寒杆菌“H”菌液、生理盐水。

2. 试管、试管架、滴管、吸管等。

【实验方法】

1. 取清洁小试管32支，排成四排，分别标记序号及“O”、“H”、“甲H”及“乙H”等字。

2. 用1ml吸管吸取生理盐水，每管加入0.5ml。

3. 在每一排的第一支试管中都加入伤寒患者（1∶10稀释）血清0.5ml，吹吸混匀。

4. 倍比稀释每排血清，即从已加有血清的第一管中吸取0.5ml，加入第二管，混匀后吸取0.5ml加入第三管，混匀后吸取0.5ml加入第四管，混匀后……直至第七管，混匀后吸取0.5ml弃去，第八管不加血清作为实验对照管（图1-2）。此时，每排每管的容量均为0.5ml，第一管至第七管的稀释倍数依次为1∶20，1∶40，1∶80，1∶160……1∶1280。

图1-2　血清倍比稀释法

5. 分别吸取伤寒杆菌O菌液0.5ml，加入第一排的各试管中；分别吸取伤寒杆菌H菌液0.5ml，加入第二排的各试管中；分别吸取甲型副伤寒杆菌H菌液0.5ml，加入第三排的各试管中；分别吸取乙型副伤寒杆菌H菌液0.5ml，加入第四排的各试管中。此时，每排各试管的血清稀释度依次为1∶40，1∶80……1∶2560。6.将各试管振荡混匀，连同试管架置于56℃水浴箱中水浴2～4h。7.小心取出试管架，手持试管（切记不要混匀）对光观察试管内液体混浊度与管底沉淀物的性状，以判断结果（表1-1）。

表1-1试管内液体混浊度与管底凝集物的性状

【实验结果】

第八管对照管为阴性反应，以“＋＋”阳性反应的最高稀释倍数为血清抗体的效价。

【思考题】

1. 试述肥达反应的判断标准。

2.阴性反应的试管为什么是均匀混浊的？

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