鞘磷脂酶D如何开启离子通道(鞘磷脂酶属于磷脂酶)
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技术指标
外观:白色或褐色无定形冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥100 U/mg酶粉;葡萄糖氧化酶:≤0.01%;ATP酶:≤0.005%;过氧化氢酶:≤0.001%.
酶学性质
来源:微生物,鞘磷脂酶;分类:EC 3.1.4.12;分子量:36kDa(SDS-PAGE);等电点:8.6;Km值:2.4×10-5 M(Sphingomyelin);抑制剂:EDTA;最适pH:8.0;最适温度:45℃;pH稳定性:6.0-8.0(37℃,60min);热稳定性:40℃以下稳定(pH 7.5,30 min);稳定性:-25~-15℃静置保存12个月保持90%以上活性.
用途:用于小而低密度脂蛋白试剂的研发和大量配制。
酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成1μmol H2O2所需的酶量。
试剂准备
试剂I:0.1 M Tris-HCl,pH 8.0。
试剂II:10 mM MgCl2溶液。
试剂III:6 mM鞘磷脂溶液:称取45.8 mg的鞘磷脂,溶于10mL的无菌水中(含5%的Triton X-100)。
试剂IV:500 U/mL ALP溶液。
试剂V:120 U/mL CHO溶液。
试剂VI:1 kU/mL POD溶液,取1000 U
的POD溶于1mL的双蒸水。
试剂VII:50 mM 4–AA溶液。
试剂VIII:50 mM TOOS溶液。
试剂IX:1.0 M NaCl溶液。
试剂X:1%(W/V)Triton X-100溶液。
酶稀释液:10 mM pH 8.0 Tris-HCl,含0.1%Triton X-100和10 mM NaCl。
按如下配制反应混合物:试剂II:20mL;试剂III:10mL;试剂VI:0.5mL;试剂VII:3mL;试剂VIII:3 mL;试剂IX:1mL;试剂X:10mL;试剂I:定容至90mL样品:用酶稀释液将酶稀释至0.01U/mL。
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