凝集试验和沉淀反应(凝集试验和沉淀试验实验报告)

导语：临床医学检验技术—凝集和沉淀反应

今天整理了下凝集反应和沉淀反应，一个是针对大分子抗原，一个是小分子抗原，两者容易混淆，所以放到一起了。

凝集反应

一、定义：颗粒性抗原或覆盖了抗原（或抗体）的颗粒性物质与相应抗体（或抗原）结合后，出现肉眼可见的凝集现象。

二、特点：颗粒性抗原如细菌、红细胞等，颗粒性物质如醛化红细胞、聚苯乙烯胶乳颗粒等。反应分为抗原抗体特异性结合和出现可见的凝集现象两个阶段，是一种定性的检测方法，也可半定量测效价。

三、分类

1、直接凝集试验：颗粒性抗原直接与相应抗体结合，在电解质的参与下，出现凝集现象。

（1）玻片凝集试验：定性，常用于菌种鉴定、血清学分型、ABO血型鉴定。

（2）试管凝集试验：半定量，常用于检测血清中有无某种特异性抗体，如肥达外斐试验。也用于交叉配血。

2、间接凝集反应：将可溶性抗原先吸附于适当大小的颗粒性载体物质表面，然后与相应抗体结合，出现凝集现象。常用载体红细胞和聚苯乙烯胶乳颗粒等。

（1）正向间接凝集反应：用抗原致敏载体检测相应抗体。

（2）反向间接凝集反应：用抗体致敏载体检测相应抗原。

（3）间接凝集抑制反应：用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。

（4）协同凝集反应：载体为一种金黄色葡萄球菌，适用于细菌及可溶性抗原检测。

（5）间接血凝试验：将可溶性抗原吸附于人的O型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体结合出现凝集反应。

（6）胶乳凝集试验：抗原与载体聚苯乙烯胶乳颗粒结合致敏后，与抗体发生凝集。

3、自身红细胞凝集试验：反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞。主要试剂材料为抗人O型红细胞的单克隆抗体。

4、抗球蛋白试验：用于检测不完全抗体，广泛用于血液病检测。直接抗球蛋白试验是检测RBC上的不完全抗体，间接抗球蛋白试验是检测血清中的不完全抗体。

沉淀反应

一、定义：可溶性抗原与相应抗体特异性结合，在适当条件下形成沉淀物的现象。

二、分类

1、液相沉淀反应：可溶性抗原与抗体在含电解质的液体介质中反应，形成沉淀物。

（1）絮状沉淀试验：在电解质存在的条件下形成絮状沉淀物。

（2）换装沉淀试验：将抗原叠加在细小玻璃管中抗体溶液的上面，抗原抗体在两液交界面处特异性结合，形成白色沉淀环。

（3）免疫浊度分析：特异性强、效价高、亲和力强。R型抗血清是较为理想的实际；反应过程中始终保持抗体过量；最适PH值6.5-8.5，一般用磷酸盐缓冲液作为反应液；增浊剂以PEG6000最为常用。

透射免疫比浊法：抗原抗体形成的复合物能引起液体介质出现浊度，使光线透过量减少，被吸收的光线量与免疫复合物形成量呈正相关。

散射免疫比浊法：激光照射在液相中的免疫复合物是，部分光线发生散射，通过测定散射光的强度检测抗原的量。

2、凝胶内沉淀反应：可溶性抗原与抗体分别放入凝胶内扩散，两者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。又称凝胶扩散。常用凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。

（1）单向琼脂扩散试验：待测抗原扩散，与抗体形成沉淀环，沉淀环大小与抗原的浓度成正相关。可定量检测。

（2）双向琼脂扩散试验：抗原与抗体均在凝胶中自由扩散，形成沉淀线。沉淀线靠近含量低的一方，弯向分子量大的一方。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。

三、免疫电泳：免疫扩散和电泳相结合

（1）火箭免疫：单向扩散和电泳相结合。作为抗原定量测定μg/ml以上含量。常用于抗原蛋白定量。

（2）对流免疫：双向扩散和电泳相结合。敏感度比双向扩散高8-16倍，可测pr至μg/ml。常用于定性分析、效价测定和纯度鉴定。

（3）免疫电泳：区带电泳和免疫双扩散相结合。定性试验。用在纯化抗原和抗体成分分析及正常和异常免疫球蛋白的识别。

（4）免疫固定电泳：区带电泳和免疫沉淀反应相结合。常用于M蛋白鉴定，尿液B-J蛋白检测及κ\λ分型。

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