细胞污染的类型及检测鉴定方法(细胞污染鉴别)

导语：细胞污染的类型及检测鉴定

对于养细胞的人来说，可谓是谈 “污”色变，在细胞培养过程中，会因取材不当、操作不慎或灭菌不彻底等各种各样的原因导致细胞污染，其结果将会导致时间及科研经费的浪费、实验数据不准确、结果不可靠和无法重复等一系列的严重后果，尤其是新手经常遇到的问题。

所以了解细胞污染类型并及时进行检测鉴别，从而清除污染，是成功实验的基础。

当然对于已经确定污染的细胞最粗暴的办法就是及时丢弃，积极排查细胞污染的原因。除非是特别的细胞才会去抢救，换句话说，抢救被污染的细胞本来就是有风险，如若抢救不挡还可能会污染别的细胞。

首先看看细胞受污染的来源有哪些：

1.外源性污染：原辅材料、操作环境、操作人员

2.内源性污染：内源性污染虽然不似外源性污染广泛，但内源性污染的检测和清除更为困难。主要表现为细胞株建库时存在的潜在污染，如制备细胞的组织或器官本身携带有病毒或支原体等。

下面我们进入正题：细胞的污染有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染、昆虫和寄生虫污染、化学污染和细胞交叉污染等多种类型。

一、 细菌和真菌污染

细菌和真菌污染很容易被检测，因为受到细菌、真菌污染的细胞，培养过程中培养基会出现肉眼可见的明显特征。

细菌污染会导致培养基出现浑浊、颜色改变以及pH值急剧变化，受污染的贴壁细胞在几天内会逐渐脱壁死亡。真菌污染后的细胞生长速度变慢，培养基中会漂浮白色、浅黄色或黑色的小点叫。因此，通过观察培养基的颜色、漂浮物、pH值或在显微镜下观察细胞及其生长状态，从而能初步判断该细胞是否受细菌、真菌污染。

除了直接观察进行判断外，还可以使用培养检测法。将细胞培养物在各类培养基中适温培养若干天后，观察是否有细菌或真菌生长。其中，在营养琼脂培养基、血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基中,37 ℃下培养可用于检测好氧细菌;在巯基乙酸盐肉汤培养基中37 ℃下培养可用于检测厌氧菌;在沙氏葡萄糖肉汤培养基中30 ℃下培养10~14天后涂片观察可用于检测其他特殊菌。

二、 支原体污染

支原体污染会影响细胞的形态、功能、代谢、细胞膜、生长速率、诱导染色体畸变、细胞内信号传导等各种细胞特征。支原体污染很隐蔽，主要表现为细胞子生长速度变慢，细胞状态形态改变，而且不断死亡，镜下没啥改变，有时可见许多黑色的细胞碎片。常用的支原体检测方法有培养法、DNA荧光染色法、酶联免疫吸附法和PCR法等。

三、细胞交叉污染

细胞交叉污染看名称很容易理解，就是被其他细胞污染替代，但除此之外还有一种就是由于实验人员贴错标签导致细胞错认。常见的细胞鉴定法有同工酶图谱分析法、人类白细胞抗原分型法和短串联重复序列图谱分析法等。

细胞污染是细胞培养过程中常常会面临的挑战, 且导致许多严重的后果。不过在做好消毒灭菌工作的基础上，其实污染也没有想象中的那么可怕，提高自己的无菌意识和操作技术才是最为重要的。

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