转铁蛋白纯品的制备实验报告(转铁蛋白在哪里合成)

导语：转铁蛋白纯品的制备

转铁蛋白纯品的制备

一、 项目背景

转铁蛋白（Tf）又称铁传递蛋白、运铁蛋白、嗜铁蛋白、铁糖蛋白，是一大类遗传相关、基本结构和生物功能相似的铁结合蛋白。Tf的生理功能是结合、运输Fe3+，调控铁的代谢，阻止游离铁通过自由基的形成对细胞产生毒副作用，具有抗菌杀菌、自我保护的抗病性能，是抑制细菌繁殖的重要因子。

二、 项目简介

转铁蛋白纯品是利用新鲜血清通过去除杂蛋白和进行离子交换色谱的方法制备的铁结合蛋白。

三、 制备材料

新鲜血液，柠檬酸钠，碳酸氢钠，三氯化铁，硫酸铵，氨水，琼脂糖。

四、 制备方法

在新鲜血液中加入抗凝剂柠檬酸钠，离心得到血清。将血清与0.1mol/L碳酸氢钠溶液混合，调节pH为7.3，再滴加0.1mol/L三氯化铁溶液，缓慢搅拌4h后静置过夜，得到过量铁饱和的血清。在血清中加入硫酸铵，使其饱和度在40～50％，搅拌2h后离心取上清液，去除白蛋白、免疫球蛋白A、免疫球蛋白G等杂蛋白。再用氨水调节上清液的pH为7.5，加入硫酸铵，使其饱和度在70～85%，静置过夜后离心，超滤脱盐制得转铁蛋白粗品。将粗品通过弱碱型阴离子交换色谱（电荷基团为乙基氨基乙基，基质为琼脂糖）制得转铁蛋白纯品，即Fe3+-Tf-CO32-红色三元配合物。

五、 制备结果

制备得到的Tf纯品是Fe3+-Tf-CO32-红色三元配合物，其pH值在酸性范围，Tf纯品在弱碱性条件下稳定。

六、 现实意义

利用铁饱和的Tf的热稳定性（60℃加热几乎无变性），结合热变性除去杂蛋白，效果较好，弱碱型阴离子交换色谱的亲水性基质比其他色谱的疏水性基质对蛋白的吸附和洗脱更加温和，蛋白活性不易被破坏，适合规模化工业生产。

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