化学发光和免疫印迹法(化学发光免疫试验的优缺点)

导语：「化学发光免疫印迹」要点和技巧（上）

凝胶电泳遇到问题怎么办？

蛋白上样时，使用专门的凝胶上样吸头或具有楔形上样孔的蛋白预制胶（这种凝胶可使用常规移液吸头上样多达60ul样品）可获得更好的结果。

高分子量蛋白转印时，可以向转膜缓冲液中加入0.01-0.05%SDS，可以促进蛋白从凝胶中转移到膜上。也可以使用特制适合大分子量（例如150kDa）的蛋白预制胶，来获得更高的分辨率，以及可在7-10分钟高效转印高分子量蛋白的转印系统或者Power Blotter快速半干转印系统。

印迹上有斑点，可以尝试将牛奶封闭液进行优化。干燥的奶粉经常难以完全溶解，而未溶解的奶粉颗粒会干扰免疫印迹检测。可以使用商品化的澄清牛奶封闭液其中不含会干扰结果的未溶颗粒，保质期也更长。

免疫印迹背景不干净怎么回事呢？如果实验中使用的是抗血清而非纯化一抗，则有可能会引起高背景。可使用不含目标蛋白的裂解液对其进行纯化。如将100ul不含目标蛋白的裂解液加入至抗血清中，4℃下振荡孵育过夜。或者可以使用商品化的信号增强剂，它不仅可以增强信号，还能降低非特异性结合，帮助获得大幅提升的信噪比。

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