coip条带怎么看(coip条带位置改变)

导语：条带依旧问题百出？IP/CoIP细节TIPS，为您整理

细胞功能，最后的执行者大多数都是蛋白质。蛋白质可谓是细胞的调控者，控制着细胞中的所有工作，但是想要细胞高效运作，往往需要多个蛋白参与，蛋白质之间的相互作用，贯穿整个生命周期，参与完整的生命过程。

想要研究清楚细胞的运作机制，蛋白之间的互作就是最基础的研究项目，而 IP/CoIP 则是研究这基础上的常用方法，关于 CoIP 的实验原理和方法前文已科普。

然而IP/CoIP 虽然常用，但并不简单，可以称得上是门技术活，跟着步骤一步步做，都可能会做不出好看的条带图，那其中有哪些需要注意的地方呢

简述实验步骤

实验中常见的细节TIPS

稍不注意，目的蛋白丢失

1. 非特异的蛋白结合：在免疫沉淀前用 ProteinA/G 珠子预洗，免疫沉淀后增加漂洗次数和严谨度（高盐或者去垢剂）；

2. 裂解液严谨度太低：改用高严谨度裂解液；

3. 实验仪器或者液体被污染：使用洁净的仪器或者液体；

4. 转移膜上存在非特异性吸附：戴手套、用镊子，不触碰膜转移面。

选择两个不同种源的抗体

在实验中，IP的抗体用量较大，会导致抗体重链55kd的信号会很强。如果用单一种源的抗体作为二抗进行显色，那么抗体重链55kd处的IP抗体的重链会干扰我们对目的蛋白的分辨如果选择两种种源的抗体，则不会有这个问题。

免疫沉淀immunoprecipitation (IP)技术原理

磁珠or琼脂糖？

任选，种类不重要，关键是品质！

磁珠或者琼脂糖的作用在于ProteinA/G可以特异性结合免疫球蛋白的FC片段，从而结合抗体，而抗体又可以和目的蛋白结合，优质的磁珠或者琼脂糖珠子对我们实验的成功帮助很大。

CoIP 为何经常遇到假阳性？

假阳性主要和抗体的浓度还有特异性有关，所以当抗体浓度高了，就降低浓度；抗体特异性差，就更换抗体。

免疫共沉淀Co-immunoprecipitation (Co-IP)技术原理

如何去除重链和轻链的影响

阴性对照记得加，可以采用的方法很多，比如用兔的lgG做对照，或者用抗 Fab和Fc的抗体特异性封闭轻链和重链。

蛋白互作信号弱，低到总是测不到

1. 裂解液过于强烈：采用温和的裂解条件，避免破坏细胞内存在的蛋白间相互作用，裂解、洗涤时需使用非变性裂解液，如 NP-40 和 Triton X-100；

2. 受蛋白亚细胞定位的影响：应该重新选择其他裂解液来释放出蛋白；

3. 蛋白间相互作用弱：增加目的蛋白的量，以捕获更多的相互作用蛋白，从而得到更容易观察的结果。具体办法有选择亲和力更强的抗体捕获更多目的蛋白。或者过表达提高目的蛋白的含量。

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