细胞培养的基本条件有哪些(细胞培养的必备条件)

导语：细胞培养的基本条件——万融实验

细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同，但随细胞生存环境的改变也会出现一定的差异。

1.无污染的细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无污染，并及时清除细胞代谢产物。要保持无菌无毒环境，必须严格做到：细胞培养用品及培养用液要经过灭菌处理，实验过程要严格按照无菌操作规程进行。

2.恒定的温度 维持培养细胞体外生存，必须有恒定适宜的温度。人和哺乳动物细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力比高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比。温度39℃～40℃1小时，细胞有一定的损伤，但仍有可能恢复；若将细胞放在40℃～41℃1小时，细胞会普遍受到损伤，仅少半数有可能恢复；温度41℃～42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有恢复可能；当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡。培养温度低至25℃～35℃时，细胞仍能生存和生长，但速度缓慢。放在4℃数小时后，再回到37℃培养，细胞仍能继续生长。细胞代谢随温度降低而减慢，当温度降至冰点以下时，细胞可因胞质结冰受损而死亡。但是，如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂（二甲基亚砜或甘油），可在深低温下，如-80℃或-196℃（液氮）长期保存。

3.气体环境 气体是体外培养细胞生存的必需条件，所需要的气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。

4.pH条件 大多数细胞的适宜pH为7.0～7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代细胞对pH的波动比较敏感，耐受性差；永生化细胞株耐受性强。但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。细胞培养液pH浓度的调节最常用的为加NaHCO3的方法，因为NaHCO3可供CO2，但CO2易于逸出，故最适用于封闭培养。

5.渗透压 人血浆渗透压约290mmol/L（290mOsm/kg），可视为培养细胞的理想渗透压。对大多数细胞来说，渗透压在260～320mmol/L（260～320mOsm/kg）范围都适宜。

6.水的质量 水是细胞中含量最高的物质，是维持细胞生命活动必不可少的物质。体外培养的细胞对水的质量非常敏感，在培养用液中任何对细胞有害的物质都会影响培养细胞的生存。因此，要求培养细胞用液必须使用新鲜三蒸水或去离子水配制。

7.细胞培养基 培养基是体外培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，也是体外培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。干粉培养基须由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。

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