elisa实验od值(elisa实验od值可以是负数吗)

导语：Elisa试剂盒OD值不正常的原因

由于Elisa的操作步骤复杂，影响反应因素较多，在实验问题中出现了一些大大小小的问题。然而这些问题也都是可以避免的，熟练掌握之后就会简单的多。

OD值不正常是什么情况？是什么原因？

1.试剂盒未回温（对应解决方法：试剂盒回温到25℃）；2.温度控制不好（对应解决方法：控制正确温度）；3.孵育时间不准确（对应解决方法：控制孵育时间）；4.洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加（对应解决方法：洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干）；5.阳光直射，对着风直接吹（对应解决方法：避风避阳）；6.酶标仪的波长错误（对应解决方法：酶标仪的波长450nm）；7.抗体的稀释错误（对应解决方法：正确的稀释抗体）；8.水质问题（对应解决方法：用矿泉水代替）。

ELISA检测中OD值很低怎么办

第一种情况，整体的OD值偏低

可能情况分析：

1. 标准问题，标准浓度有没有提高的潜力，标准曲线的拟合方式等2. 显色试剂问题，显色试剂是否新鲜，是否污染3. 检测抗体，检测抗体效价是否OK，保存方法是否合适，稀释液中不含有蛋白质，基质中有影响酶活的物质等4. 体系中是否有其他影响抗原抗体结合的物质5. 孵育条件是否正确6. 洗涤不能过猛，洗涤过猛也可能会造成显色偏低

第二种情况，标准曲线OK，样本的OD值很低

情况概述：操作步骤完全按照要求，样本信息也适用，样本类型血清，标曲OK，但就是样本的OD值很低，不在曲线范围内。

可能情况分析：

1. 一般标曲OK，试剂盒基本没有质量问题，这个时候先去分析样品和保存方法的原因2. 样品是否新鲜，小爱之前看到很多论坛大咖建议用新鲜样品检测，将标准品稀释后加入血清或血浆中检测（也就是血清进一步稀释标准品），观察检测结果，判断是否是血清中有未知物质影响3. 血清中成分复杂，标准蛋白的稀释液成分简单，血清中可能有450nm显色物质与板底非特异结合，或者有些非特异结合抗体的蛋白，不能洗干净，所以本底比标准样品稀释液高4. 适当延长显色时间5. 更换酶标仪，排除仪器原因6. 联系我们，尝试其他方法

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