荧光素酶报告实验详细过程(荧光素酶实验怎么检测荧光)

1、 实验简介

Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光（波长540-600nm），且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的稳定性及翻译效率相关。从而将待测启动子、UTR等序列与荧光素酶ORF框融合表达，再检测其发光强度，就能判断这些序列对蛋白表达的影响

为了减少实验误差，同时转染一个能稳定表达的肾荧光素酶的质粒作为内参，催化腔肠素氧化产生蓝光（波长460-540nm）；所以叫双荧光素酶报告基因检测。

2.实验流程图

3.服务内容：双荧光素酶报告检测启动子活性服务主要分为以下两种：

a. 启动子活性分析，用于检测待测启动子是否有活性及其活性区域；

b. 启动子与转录因子结合验证，用于研究某转录因子是否调控某基因的待测启动子，以及它们的结合区域

项目

服务内容

结果交付

实验周期

客户提供

启动子活性分析

合成和构建2kb启动子荧光素酶载体

载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

30工作日

1、细胞

2、基因信息

构建截短启动子荧光素酶载体

载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

细胞培养和双荧光素酶检测

检测数据和实验报告

启动子与转录因子结合验证

合成和构建野生型启动子荧光素酶载体

载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

30工作日

1、 细胞

2、 基因及转录因子信息

构建突变型启动子荧光素酶载体

载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

构建转录因子表达载体

载体质粒、甘油菌、测序结果和实验报告

细胞培养和双荧光素酶检测

检测数据和实验报告

4. 送样要求

a.重组载体：

质粒不少于2ug，或甘油菌约100ul

b.细胞：

活细胞，2个T25瓶，细胞汇合度＞80%（广州市内）；或冻存细胞2管（广州外地区）

备注：载体或细胞可由如期代为构建或购买

5. 样本保存和运输要求：

a. 质粒或甘油菌可用冰袋保存运输；

b. 活细胞常温取样；

c. 冻存细胞干冰取样/运输：需要至少在送样前一天通知我方。

免责声明:本站部份内容由优秀作者和原创用户编辑投稿，本站仅提供存储服务，不拥有所有权,不承担法律责任。若涉嫌侵权/违法的，请与我联系，一经查实立刻删除内容。本文内容由快快网络小纳创作整理编辑！