2022检验主管技师考试考点|ELISA技术中常用的酶及底物

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ELISA是酶免疫技术中非常重要的临床应用，在各种微量物质的检测中发挥着非常重要的作用，比如各种肝炎病毒，细胞因子，细菌毒素等，而其常用的酶及底物也是需要大家记忆的考点，在检验技士考试中有很重要的考题。

ELISA常用的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶等。首先对于辣根过氧化物酶主要来源于蔬菜植物辣根中，是由无色的糖蛋白和亚铁血红素结合而成的复合物。HRP是目前在酶联免疫吸附试验中应用最为广泛的标记用酶。HRP的底物常用的有邻苯二胺(OPD)和四甲基联苯胺(TMB)。OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。TMB已成为目前ELISA中应用最广泛的底物;碱性磷酸酶(AP)是一种磷酸酯水解酶，可以从大肠杆菌或小牛肠黏膜提取。AP的底物常用对硝基苯磷酸酯(p-NPP);β-半乳糖苷酶(β-Gal)来源于大肠杆菌，分子量540kD，最适pH6～8.因人血中缺乏此酶，以其制备的酶标志物在测定时不易受到内源性酶的干扰，从而提高特异性，被用于均相酶免疫测定中。β-半乳糖苷酶的底物常用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)，酶作用后，生成高强度荧光物4-甲基伞酮，其敏感性较HRP高30～50倍，但测量时需用荧光计。

这三类酶及其对应底物是需要大家做到区分记忆的，尤其是辣根过氧化物酶及其底物经常会出现在考题中。

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