冻干培养细菌的方法有哪些(冻干培养基)
在生活中,很多人可能想了解和弄清楚冻干培养细菌的方法的相关问题?那么关于冻干培养细菌的方法有哪些的答案我来给大家详细解答下。
1. 冻干简介:
冷冻干燥,也称为冻干或冷冻干燥,是在产品冷冻后除去水分并将其置于真空中的过程。这使得冰可以从固体变为蒸汽,而无需经过液相。冰(或其他冷冻溶剂)通过升华过程从产品中可以去除,是结合水分子通过解吸过程去除。※ 常用细菌培养基:肉汤培养基和普通琼脂培养基,LB培养液,TSB培养液,TSA培养基等,FT培养液,TSC培养基,麦康凯培养基,血琼脂平板。
2. 什么情况下适合冷冻干燥长期保存细菌、真菌、酵母或其他微生物培养物的最佳方法之一是使用冷冻干燥过程。这一简短的实验室程序可以与任何商用冷冻干燥器一起进行,以保存培养物收集。因为冷冻干燥是最复杂和最昂贵的干燥形式,所以该过程通常仅限于价值较高的细腻、热敏材料。未被冷冻损坏的物质通常可以冻干,因此无需冷藏。冻干的过程可能只需要三个小时,也可能需要24小时(不包括培养物生长时间)。
3. 实验所需仪器※ 冷冻干燥机※ 高压灭菌器※ 营养素或其他合适的琼脂平板※ 培育培养物的孵化器※ 玻璃棒※ 冻干缓冲液※ 用橡皮塞压接顶部小瓶(用压接器压接瓶盖)
4. 冻干及存储过程需要的试剂※ 常用冻干保护剂:10%脱脂奶粉,5%蔗糖,1%明胶,溶于纯水中※ 冻干保护剂的作用:冻干保护剂是在在冻结和干燥过程中,可以防止活性组分发生变性。※ 填充剂:能防止有效组分随水蒸汽一起升华逸散,并使有效组分成形。※ 抗氧化剂:用作防止生物制品在冷冻干操过程以及储藏过程中发生氧化变质。※ 酸碱调整剂:在冷冻干澡过程和储藏过程中,能将生物制品的pH调整到活性物质的最稳定区域。
5. 冻干的步骤a. 所有冻干培养基、保护剂以及容器等均需高温高压灭菌。高压灭菌前,在试管内贴上印有培养物标识的纸标签。或者,使用带无菌帽的试管;b. 取一环分离后所得到的细菌菌液或者是甘油保存的菌液,在细菌培养板上分区或者使用蛇形划板(大肠杆菌在麦康凯平板上划板),37℃倒置培养并过夜;c. 取一只干净并且进行高温高压灭菌后的试管,倒入大约10ml的细菌培养液(大肠杆菌用磅培养液),从过夜培养后的培养平板中取一个单菌落至该培养液中后,在37℃温度条件下振荡培养过夜;d. 取10支清洗干净且进行灭菌处理后的西林瓶,每个西林瓶中加入 1ml的冻干保护剂,后加入过夜培养后的1ml 菌液,盖上无菌橡胶塞,备注:需要保留出气孔,并做好标记后,存放于-80℃冰箱冷冻存储;e. 细菌冻干机预热约30分钟后,迅速将已冷冻的菌液放在细菌冻干机上,打印几小时至十几小时不等细菌已冻干。f. 冻干后关闭冻干机,取出已经冻干好的细菌,压盖密封,存储在 -80℃条件下超低温冰箱保存,可存放数年。
温馨提示:通过以上关于冻干培养细菌的方法内容介绍后,相信大家有新的了解,更希望可以对你有所帮助。