脐带血单个核细胞(脐带血与脐带哪个有必要存)

导语：脐带血单个核

脐带血单个核细胞:是指脐带血中具有单个核的细胞，包括单核细胞和淋巴细胞，目前脐带血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll密度梯度离心法。

密度梯度离心原理:利用不同颗粒之间存在沉降系数差，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带，根据血液中各成分比重的不同:红细胞>中性粒细胞>淋巴细胞>单核细胞>血浆(包括血小板)，用Ficoll外周血淋巴细胞分离液(相对密度为1.077±0.001，介于中性粒细胞与淋巴细胞之间)将脐血细胞分成不同的层次。

“如期生物”脐血单个核细胞科研产品优势:

“如期生物”脐血单个核细胞取自健康足月分娩孕妇的脐带血分离制备而成;

“如期生物”生产产品经过严格制备、检测环节，每一份产品均有独立的检测报告。保证产品高质量的

同时确保产品血液传染病检测均合格，避免操作人员因操作不慎导致感染风险。

警告：产品仅供科研使用，严禁用于临床治疗和其他用途使用！

操作原则:

1.要在无菌条件下，如生物安全柜或洁净工作台处理该产品;

2.操作人员在操作过程中注意穿戴防护服;

3.我们建议细胞的接种密度为25-4.0x104cells/cm2，具体数量请根据细胞状态加以调整。

复苏和培养:

脐带间质干细胞的复苏和培养:

1.准备好37℃水浴。

2.准备好人脐带间质干细胞完全培养基，温育到37℃。

3.在15 mL离心管中加入9 mL的人脐带间质干细胞完全培养基。

4.从液氧罐口取出冻存的人脐带间质干细胞，立即放入-80℃冰箱(目的是让进入冻存管的液氮稍加挥发)。

5.在-80℃放置2-3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37℃温水中，快速晃动使管中内含物尽快融化。仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。

6.用70%-75%酒精消毒冻存管口的外壁。

7.在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液移入装有9 mL完全培养基的15mL离心管中。在这一过程请尽可能避免产生气泡。

传代:

脐带间质干细胞的传代:

1.将人脐带间质干细胞完全培养基、PBS、0.25%EDTA预热至37℃。。 2.吸去培养液。

3.用PBS(T25培养瓶加入约3 mL，T75培养瓶加入约6 mL)洗涤细胞2-3次。注意不要损害贴壁的细胞。

4.吸去PBS。

5.加入0.25%EDTA(T25加入约1mL，T75加入约2-3mL)。轻轻旋转，使EDTA覆盖细胞表面，消

化，显微镜下观察到约70%-80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养器皿的壁使细胞脱壁。

6.当看到明显的细胞脱落下来，立即加入预热的完全培养基(T25培养瓶加入约3m，T75培养瓶加

入约6 mL)终止消化。

7.用吸管吸取液体，反复吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿底壁。吹打时动作不宜太猛，

尽量避免产生气泡。

8.将细胞悬液转移到15 mL的离心管中。

9. 250 g，离心5min。

10,小心弃去上清液。

11.加入2 mL完全培养基重悬细胞。吹打时动作不宜太猛，尽量避免产生气泡。

12.对细胞进行台盼蓝染色计数活细胞数量。

13.按照2.5-4.0x104个活细胞/cm2的密度来接种细胞。

14.加入适量的人脐带间质干细胞完全培养基，轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。

15.把细胞放入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。

换液:

脐带间质干细胞的换液:

1.传代后发现有很多死细胞，应该予以换液。

2.当人脐带间质干细胞的完全培养基pH值变酸时(培养液的颜色变黄)，而且此时细胞仍未可以传

代，则应该予以换液。一般来说，人脐带间质干细胞的换液间隔为2-3天。

（1）倾斜培养瓶，用移液管吸掉7mL培养上清液。

说明:吸掉培养上清液时，尽量不吸走未贴壁的组织块。

（2）加入7mL完全培养基，摇匀。

冻存:

脐带间质干细胞的冻存:

1.待细胞生长至可传代的密度，即可消化准备冻存。

2.细胞的消化。

3.对细胞进行计数。

4.消化后的细胞悬液经250 g离心5 min。

5.小心弃去上清。

6.用10%DMSO冻存液重悬细胞，并使细胞的密度为1x106个活细胞/mL(或希望达到的细胞密度)。

7.把细胞分装到冻存管(需提前做好标记或贴上标签)中，旋紧冻存管盖。

8.将封好的冻存管放进程序降温盒，再放入-80℃冰箱。

9.24 h后将细胞转移至液氮进行长期保存。

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