微生物细胞计数方法(微生物细胞数的计数实验报告)

导语：微生物细胞数的计数——万融实验

一、目的

了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法。

二、仪器与材料

显微镜、血球计数板、移液管、酵母菌液（准备见附录）。

三、血球计数板的结构和计算方法

血球计数板由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成。玻片中央刻有四条槽，中央两条槽之间的平面比其他平面略低，中央有一小槽，槽的两边的平面上各刻有9个大方格，中央的一个大方格为计数室，其长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其体积为0.1mm3。计数室有两种规格：一种是把大方格分成16中格，每一中格分成25小格，共400小格；另一种规格是把大方格分成25中格，每一中格分成16小格，总共也是400小格。计算方法如下：

1．16×25的计数板计算公式

细胞数／ml：100小格内的细胞数／100×400×10×1000×稀释倍数。

2．25×16的计数板计算公式

细胞数／ml：80小格内的细胞数／80×400×10×1000×稀释倍数。

四、操作步骤

（1）稀释样品，为了便于计数，将样品适当稀释，使每格约含5个细胞。

（2）取干净的血球计数板，用厚盖玻片盖住中央的计数室，用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖玻片的边缘，菌液则自行渗入计数室，静置5～10分钟即可计数。

（3）将血球计数板置于载物台上，用低倍镜找到小方格后换高倍镜观察计数。需不断地上、下旋动细调节器，以便看到计数室内不同深度的菌体。现以16×25规格的计数板为例，数四个角（左上、右上、左下、右下）的四个中格（即100小格）的酵母菌数。如果是25×16规格的计数板，除取四个角上四中格外，还取正中的一个中格（即80小格）。对位于大格线上的酵母菌只计大格的上方及左方线上的酵母菌，或只计下方及右方线上的酵母菌。

每个样品重复计数3次，取平均值，再按公式计算每毫升菌液中所含的酵母菌数。

图6-1 血球计数板的结构图

（4）洗涤血球计数板。

使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。

思考题

1．结果：将结果记录于下表中。A表示5个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。

25×16的计数板观察计数记录结果

16×25的计数板观察计数记录结果

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2．为什么用两种不同规格的计数板测同一样品时，其结果一样？

3．在计数板计数操作过程中，说明血球计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？

4．如何正确使用计数板计数？其操作步骤和工作原理是什么？如何进行计算？

5．除计数板可以进行微生物细胞计数外，还有哪些方法可以进行细胞计数？

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