导语：土壤淀粉酶的测定方法（比色法）

土壤淀粉酶是土壤中催化淀粉水解的一类酶的总称,主要来自于微生物。具体测定方法如下：

一、实验试剂

所有试剂除注明者外，均为分析纯。实验用水为蒸馏水或去离子水或相当浓度的水。

（1）2%淀粉溶液；

（2）甲苯；

（3）3,5-二硝基水杨酸溶液：称取0.5克二硝基水杨酸，溶于20mL 2mol/L氢氧化钠和50毫升水中，再加入30克酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至100mL(不超过一周）

（4）标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58℃条件下，真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml蒸馏水中，即成葡萄糖标准溶液(5mg/ml)。再将此液稀释10倍制成葡萄糖工作液；

（5）PH 5.6磷酸盐缓冲液：量取1/15 M Na2HPO4（11.876g/l）0.5ml和1/15 M K2HPO4 （9.078g/l）9.5ml，混匀可得。

二、实验仪器

（1）恒温振荡水浴锅（AAH44312K，JeioTech/杰奥特）；

（2）容量瓶（100 ml）、烧杯（盛滤液用）（50~100 ml）、50 ml三角瓶若干、电子天平（DV215CD,美国OHAUSI）；

（3）分光光度计（UV-1800PC）；

（4）可调移液器（5 ml）、可调加液器（50 ml）；

（5）其它常规仪器。

三、实验步骤

（1）称取适量土样，置于50m三角瓶中，并加入5滴甲苯,注入10mL 2%淀粉溶液和10ml的磷酸盐缓冲溶液，摇匀混合物后，放入恒温水浴锅中，在37℃C下培养24h；

另设无基质和无土对照

（2）培养结束时，加入35ml水，迅速过滤至50m容量瓶，并用水定容。

（3）从中吸取滤液1mL滤液（按实验实际可调整），加3ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即培养结束时，加入35ml水，迅速过滤至50ml容量瓶，并用水定容。

（4）此时溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水定容至25mL，15min后在分光光度计上于波长508m处比色每一土壤需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。

四、绘制标准曲线

（1）在分析样品的同时，取0、1、2、3、4、5、6、7mL葡萄糖工作液，分别注入50mL容量瓶中，并按与测定淀粉酶活性同样的方法进行显色，比色后以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。 4.1.5、结果计算以5h后1g土壤中葡萄糖的质量（mg）表示淀粉酶活性

式中：a为由标准曲线求得的葡萄糖浓度(mg/mL)；

V为显色液体积(50mL)；

n为分取倍数；

m为烘干土重(g)

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