elisa实验中几种常见问题及造成这些问题的主要原因(elisa实验问题与启发)
导语：ELISA实验常见问题（一）
ELISA实验原理简单，步骤少，流程短，试剂盒操作相对简便，实验小白也能轻松上手。然而，实验上手虽快，想要得到可靠的实验结果，却并不那么容易。
为了更好地助力实验，这里将大家关心的ELISA试剂盒＆样本常见问题整理如下：
试剂盒
Q1 你们的ELISA试剂盒能检测什么物种？
A1
目前我们的试剂盒检测的种属主要为人、小鼠、大鼠；小部分指标涉及猴、兔、猪、鸡等特殊种属。
如果试剂盒的命名带有特定指向（如人），代表专门针对此物种；没有指明物种，则代表该试剂盒在目前公司产品涉及的种属（例如人、小鼠、大鼠、猴、兔等）内通用；其他特殊种属的检测适用性，请联系技术支持确认。
Q2 96T ELISA试剂盒能检测多少样本？是否需要做复孔？
A2
为了保证实验结果的准确性，我们建议标准品和样品都做复孔，但并不强行要求ELISA实验一定要做复孔/3复孔，客户可根据自己的需求设定复孔实验。详细信息见下表：
规格
标曲
样品
可检测样品数
96T
不做复孔
不做复孔
88
做复孔
不做复孔
80
不做复孔
做复孔
44
做复孔
做复孔
40
Q3 需检测的样品较多，能否减少标曲的孔数？
A3
为保证结果的准确度，不建议减少标曲的孔数，请确保能够检测至少6个不同的标准品浓度（含空白孔)。
Q4 ELISA试剂盒要使用多次，但样本较多，是否可以只做一次标曲？
A4
虽然ELISA实验的操作步骤相同，但每次实验的各种影响因素都会有所变化。所以，每次实验时，都必须重新绘制标准曲线，以得到更准确可靠的检测结果。
如果需要做多次实验，溶解后的最高浓度标准品可以分装保存于-20℃条件下，避免反复冻融，半个月内使用有效。
样本
Q1 血清血浆样本应该选用哪种真空采血管收集？
A1
血清：不含抗凝剂的采血管/含促凝剂采血管
（通常为红色、黄色、橘色管盖的采血管）
血浆：含抗凝剂的采血管
（通常为绿色、紫色管盖的采血管）
样品收集后，若在1周内进行检测，可保存于2-8℃条件下；若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃条件下（1个月内检测）或-80℃条件下（3个月内检测），避免反复冻融。
检测前，应缓慢融化冷冻过的样本，并离心除去冻融过程中产生的沉淀物。
Q2 采集时，如何尽可能避免溶血现象？
A2
溶血可由多种理化因素和毒素引起。在体外，机械性强力振荡、低温冷冻等诱因均可引起溶血。为避免溶血对检测结果产生影响，应注意：
（1）静脉采血时，回抽压力不宜过大；
（2）一次性采血量不宜过少；
（3）采集的全血不宜激烈振荡；
（4）离心转速不宜过大；
（5）收集的全血需尽快处理成血清/血浆，全血不能冻融；
（6）若需要麻醉采血，需使用没有溶血作用的麻醉剂。
Q3 组织/细胞样本收集中提到的“反复冻融”，过程应该如何操作？
A3
组织样本：组织研磨后，将其-80℃放置1h/液氮放置0.5h，再置于30℃水浴锅中轻微振荡，使其迅速融化，反复操作1-2次即可；
细胞样本：按上述操作步骤，反复冻融2-3次。若为膜蛋白，可以适当做超声处理，但需要控制好超声的温度、频率；
建议在样本中提前加入蛋白酶抑制剂。常规情况下推荐使用PMSF。
Q4 怎样判断我的样本是否需要稀释或做其他处理？
A4
试剂盒的检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度，并通过预实验确定样本的实际浓度情况。
如果是常规样本类型，可以咨询ELISA技术支持，以获取样本的推荐稀释倍数，并安排预实验检测；
如果样品中待测物的浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩；
如果样本中的分析物浓度远低于试剂盒的最低检测限，建议选择灵敏度更高的试剂盒来检测。
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