导语：什么是菌种分离与培养？组织和基内菌丝分离法的区别是什么？

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菌种分离是在无菌条件下，将所需要的食用菌与其他微生物分离，在适宜条件下培养以获得纯培养物的过程。分离纯化得到的纯培养物即母种，母种质量是菌种生产的基础。食用菌菌种分离方法主要有组织分离法、基内菌丝分离法和孢子分离法。无论是组织分离还是孢子分离的菌种，都要通过出菇试验才能筛选出好适用于生产的菌种，切不可直接用于生产。

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一、组织分离法

组织分离法是指在食用菌子实体或组织体上切取一小块组织，使其在培养基上萌发而获得可育的纯菌丝体的方法，属于无性繁殖，简单易行。食用菌子实体、菌核和菌索都是由双核菌丝体扭结形成的，其具有较强的再生能力，并基本保持了亲本的种性。（一）子实体组织分离：从食用菌子实体上切取一块菌肉组织，经过分离培养，通常可以获得纯培养的母种。1.种菇选择种菇是指被选择出来进行组织分离的子实体。一般在出菇较早且整齐、外观较理想、无病虫害、产量高的栽培袋或菇床上，选择个体肥大、菌盖肉厚、开伞4~6分的幼嫩子实体，切去菌柄，待分离。2.接种场所消毒组织分离操作可在超净工作台、接种箱或无菌室内进行。接种空间可采用紫外灯照射消毒，也可以同时采用药物熏蒸、药液喷雾进行空间消毒；用75％的酒精擦拭操作台，然后将种菇、接种用具（酒精灯、刀片或小镊子等）及母种培养基置于操作台上，超净工作台开机20min后即可使用。

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3.分离方法按照无菌操作要求，在酒精灯火焰形成的无菌区内（灯焰周围10cm内），将子实体纵向撕开或剖开，用无菌的刀片或小镊子在菌盖中央部位取绿豆大小的小块菌肉组织，迅速转移至斜面培养基上，塞上棉塞。对于某些特殊的食用菌种类，组织分离所取的部位有所差别。如灵芝所取的部位为菌盖边缘的白色生长圈；金针菇是取横切菌盖上部的菌肉，或取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片；而木耳等胶质菌类的菌肉更薄，子实体经无菌水反复冲洗后，撕开子实体，或用刀片将两层耳片切开，在不孕面一侧挑取一小块菌肉组织，也可从尚未展开的耳芽顶端挑取一小块组织。4.菌种培养菌种培养应控制好环境温度、湿度、空气和光线，其中以温度最为重要。经2~3d培养，组织块上即可萌发出大量菌丝；此后检查菌丝生长及杂菌污染情况，每隔2~3d检查1次，立即淘汰污染的试管。选留菌丝体生长整齐、生长势强的试管，待菌丝体长满斜面后，即为原始母种。

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（二）菌核及菌索组织分离：某些食用菌在生长发育过程中形成块状的菌核，或绳索状的菌索。在菌核或菌索上切取一小块组织，通过组织分离培养，即可获得母种。选择个体较大、饱满、幼嫩且无病虫害的新鲜菌核或菌索，将表面的泥土及杂物冲洗干净，在无菌场所采用70％酒精对菌核或菌索进行表面消毒；然后在酒精灯火焰旁，用无菌刀将菌核切开，或去掉菌索的黑色外皮层（菌鞘），切取一小块内部组织，迅速移入母种培养基中部，塞上棉塞。由于菌索较细小，分离时易污染，可在培养基高压灭菌后加入广谱抗生素，每毫升培养基加链霉素或青霉素50~100单位，以抑制细菌生长。

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二、基内菌丝分离法

在培养基（料）中直接挑取已经生长好的菌丝，通过分离培养而获得母种的方法，称为基内菌丝分离法。该方法主要用于木耳、银耳等不易进行组织分离的食用菌。（一）菇木或耳木分离法：菇木或耳木的采集必须在子实体生长盛期进行。在已经长过子实体的菇木或耳木上，选择菌丝生长旺盛且周围无杂菌的部分，用钢锯截取一小段。先将菇木或耳木表面的杂物洗净，然后风干或充分晾干，使菇木或耳木干燥。在菌种分离之前先将菇木或耳木通过酒精灯火焰，重复多次，通过灼烧消灭表面杂菌，再用75％酒精表面消毒。用无菌刀挑取表皮下的小块菇木组织，接入母种培养基上进行培养。接种场所消毒及菌种培养均参照“子实体组织分离”方法。

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（二）袋栽基质分离法：选择子实体发生较早、产量高、无病虫害的栽培袋，待子实体长至七八分熟时，去掉子实体，用75％酒精对整个栽培袋进行消毒。在无菌条件下进行基质分离，用接种针挑取小块长有菌丝的培养料，接入母种培养基中进行培养。接种场所消毒及菌种培养均参照“子实体组织分离”方法。

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