耐药细胞株构建(如何构建耐药细胞系)

导语：科研模型：耐药细胞系的构建方法建立

耐药性细胞株是通过适当时间试剂的诱导使某种细胞系对此试剂敏感度降低，细胞株的耐药性是通过检测IC50的比值，来判断细胞耐药程度。一般建立耐药株有多种方法，下面介绍一下我们常用到的耐药株构建方法，仅供大家参考。

1.使用对象：各种细胞系；

2.药物：各种药物，主要还是看目的；

3.实验步骤

（1）检测初始细胞系的IC50：IC50指半抑制浓度，一般是用过至少5个药物浓度梯度去处理细胞系，处理24h或者48h后进行MTT检测，绘制抑制曲线，计算抑制率为50%时的药物浓度；

（2）初始药物培养：将细胞系正常培养后，以药物的IC50的值和IC30的值先进行初始培养，如果培养1-2周细胞还能正常传代扩增，即选择IC50值继续培养；

（3）在培养过程中最好每培养2-3代的细胞进行形态拍照，或者每个月进行一次拍照，部分细胞在培养过程中形态会发生改变，部分细胞在培养过程中会死亡，这是可能药物浓度过高，则需要降低药物浓度，若细胞还是出现死亡，则需要间歇式诱导，在药物诱导24h-48h后，去除药物，换新培养基对细胞进行恢复，恢复24-72h后再次进行药物培养；此过程中需要对药物刺激的浓度、时间都需要进行摸索；若细胞生长良好，则可以梯度慢慢增加药物浓度，使细胞尽快获得耐药性。

（4）耐药性检测：对诱导培养后的细胞系进行IC50的检测，耐药系数（RI）=诱导细胞IC50/初始细胞IC50。一般我们是培养2个月后检测一次，后续每培养1个月检测一次，若文献中此耐药株经常都是诱导12个月、10个月等，那么也可以每3个月检测一次；

4.后续耐药机制检测

（1）实验样本：初始细胞株、耐药细胞株（耐药细胞的机制研究可以使用中度、高度耐药系，看实验需求）

（2）转录组测序寻找耐药基因或者直接WB、免疫荧光等方法检测耐药基因的表达情况；

（3）对耐药细胞进行某个基因的抑制剂处理或者过表达等，均可用来研究分子机制。

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