溶血空斑实验有哪些方法各有什么优缺点(溶血空斑实验实际应用)

导语：溶血空斑试验（小室液相法）——万融实验

【实验原理】

溶血空斑试验，又称空斑形成细胞（plague forming cell，PFC）试验，是一种体外检测抗体形成细胞的方法。将经绵羊红细胞（SRBC）免疫的小鼠脾细胞（含有抗体形成细胞，PFC）与一定量的绵羊红细胞和补体混合孵育。PFC所分泌的抗体和绵羊红细胞结合形成抗原抗体复合物，在补体作用下可使绵羊红细胞溶解，在特制的小室内形成肉眼可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞（浆细胞）。

【材料与仪器】

1. 小鼠、5％和15％SRBC（绵羊红细胞）、补体（经SRBC吸收，临用时稀释成1∶6浓度）、Hank&39;s液的平皿中研磨，尼龙网过滤至试管，混匀，1000r／min离心10min。用Hank&39;s液中，即为浓度约1×107／ml的脾细胞悬液。

2.制作小室：取洁净无脂载玻片（75mm×25mm）两张，用双面胶带在载玻片两端和中间各粘一条，将两张同样的载玻片紧密地粘在一起，即形成两个小室（图4-1）。将此双层玻片的一侧长边浸入融化的石腊池中以封闭小室的一边（无需浸入过深，以能封闭小室边缘为准）。

3.制备小室灌注混合液：试管1：取1×107／ml脾细胞悬液50μl、15％SRBC50μl、1∶6补体50μl、Hank&39;s液300μl。混匀后，用微量加样器分别取上述两只试管中的混合液灌注两个小室（尽量避免产生气泡），蜡封，做好标记，平放于玻片盘内，置37℃孵箱孵育45min～1h后，观察结果。

【实验结果】

加试管1混合液的小室有多个透明的溶血空斑形成，加试管2混合液的小室（对照）没有（图4-1）。一个空斑即代表一个空斑形成细胞（抗体形成细胞）。

图4-1　空斑形成细胞实验结果上图为气泡，下图为空斑形成；左为实验管，右为对照管

【思考题】

1. 观察结果时，如何辨别空斑与气泡？

2. 为何说一个空斑即代表一个空斑形成细胞？

3.在本实验中，抗体、抗原各是什么？

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